千葉工業大学　プロジェクト研究年報　2014年版

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抑制効果を検討した。Ac/HIV-1-gag感染MDDCsへHIV-1-NL4-3を感染させてp24を測定し、さらにPBMCsと共培養したp24も測定した(図２)。図２の結果からAc/HIV-1-gag 感染MDDCsによるHIV-1産生が抑制された。一方、Ac/HIV-1-gag感染樹状細胞とヒト末梢血単核球を共培養した場合でもHIV-1が抑制され、樹状細胞からT細胞へ受け渡されるHIV-1量も減少した。この要因として考えられることは、Ac/HIV-1-gag で活性化した樹状細胞内において、抗HIV-1宿主因子であるAPOBEC3F/Gの発現上昇によるものと考えられる(図３)。 図3. RT-PCR/Western blotによるAPOBEC3G、APOBEC3F mRNA及びタンパク質の発現確認 抗HIV-1宿主因子であるAPOBEC3F/GはMDDCsからINF-αにより活性化されて、標的とするHIV-1がハイパーミュテンションを起こし、変異が導入されたウイルスの増殖は二次感染ができずHIV-1産生が抑制される。そこで、INFレセプターをブロックする抗体とINF-αに直接作用する抗体を用いたところHIV-1産生は抑制されなかったことから、INF-αがAPOBEC3F/Gの活性化に要求されることを明らかにした。 最終的にHIV-1感染抑制について評価を行った。rBV感染BMDCsをマウス(BALB/c,6ws)マウスへ接種し、HIV-1 NL4-3-VSV-Gを感染させところ、血清中のp24量が未成熟BMDCと比較して優位な減少が認められた（図4）。これらの結果から、バキュロウイルス感染BMDCsから産生 図4．Ac/HIV-1-gag (rBv)感染MDDCsによる抗HIV-1効果。 されたサイトカイン及びGagタンパク質がNK細胞、T細胞及びB細胞を活性化し、HIV-1感染を抑制したと考察される。 以上の結果をまとめると、HIV-1 Gag発現バキュロウイルスはマウス樹状細胞を活性化させると共に、抗HIV-1宿主因子であるAPOBEC3F/G を活性化させることでHIV-1感染抑制効果を示した。組み換えバキュロウイルス感染DCワクチンは新規のエイズワクチンとして期待される。 本研究に関する主な発表論文 (1) Chang MO, Suzuki T, Suzuki H, and Takaku H. HIV-1 Gag-Virus-Like Particles Induce Natural Killer Cell Immune Responses via Activation and Maturation of Dendritic Cells. J. Innate Immun. 4:187-200 (2012). (2) Chang M O, Suzuki T, Yamamoto N, Watanabe M, and Takaku H. (2012) HIV-1 Gag-virus-like particles inhibit HIV-1 replication in dendritic cells and T cells through IFN-α-dependent upregulation of APOBEC3G and 3F. J.Innate Immun. 4,579-590 (2012). (3) Kawahara M and Takaku H. Intradermal immunization with combined baculovirus and tumor cell lysate induces effective antitumor immunity in mice. Int.J. Oncol. 43, 2023-2030, 2013. (4) Shimizu M, Yanase S, Chang M.C, Okamatsu M, Sakoda Y, Kida H and Takaku H. Influenza Virus-like particles containing HA, NA, and M1 induced protection in chickens against a lethal challenge with the highly pathogenic H5N1 avian influenza virus. J. Vaccines & Vaccination. 4, 6, 2013 学会発表 (1) FUJIHIRA Atsushi、SUZUKI Tomoyuki、CHANG Myint Oo、 TAKAKU Hiroshi：Induction of anti-tumor immunity against human pancreatic carcinoma by baculovirus-infected dendritic cells。 第41回日本免疫学会学術集会、神戸 (２０１２.12) (2) 緑川 拓哉、CHANG Myint Oo、高橋 翔輝、黒崎 直子、高久 洋：HIV-1 Gag発現組換えバキュロウィルスによる免疫応答。第60回日本ウイルス学会学術集会、大阪 (2012.11) 参考文献 １） Suzuki T, Chang MO, Kitajima M, Takaku H. Induction of antitumor immunity against mouse carcinoma by baculovirus-infected dendritic cells.Cell. Mol. Immunol. 7(6):440-446, 2010. ２） 9.Suzui T, Chang MO, Kitajima, M, Takaku H. Baculovirus activates murine dendritic cells and induces non-specific NK cell and T cell immune responses. Cell. Immunol. 262(1):35-43, 2010. HIV(NL4-3-VSV-G)Control BMDCWild BV-BMDCrBV-BMDCHIV(NL4-3-VSV-G)Control BMDCWild BV-BMDCrBV-BMDC-100200300400500600700800900SerumSpleenNon-infected miceHIV(NL4-3-VSV-G)Control BMDCWild BV-BMDCrBV-BMDC-100200300400500600700800900-100200300400500600700800900SerumSpleenNon-infected miceHIV(NL4-3-VSV-G)Control BMDCWild BV-BMDCrBV-BMDCNon-infected miceHIV(NL4-3-VSV-G)Control BMDCWild BV-BMDCrBV-BMDCHIV(NL4-3-VSV-G)Control BMDCWild BV-BMDCrBV-BMDCP24 (pg/ml)2014　千葉工業大学附属総合研究所　プロジェクト研究年報　　　　　　　　　　Project Report of Research Institute of C.I.T 2014　　　　　　120

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